Capture par photo-affinité ou affinité ? Application à la détection et l’identification de formes actives de MMPs par spectrométrie de masse.
CEA
La détection de formes actives des métalloprotéases de la matrice (MMPs) dans des situations pathologiques déboucherait à la fois sur des connaissances d’ordre fondamental, mais aussi sur des applications diagnostiques. Afin d’identifier les MMPs présentes dans un protéome complexe sous forme active, une équipe de l’iBiTec-S a développé à la fois des sondes de photo-affinité et d’affinité spécifiques de ces protéases, permettant de les isoler à la surface de billes magnétiques. Une étude permettant de comparer les deux types de sondes synthétisées a permis de démontrer la meilleure efficacité d’un système de capture par affinité. Une fois les MMPs capturées à la surface des billes magnétiques, leur identification (23 membres chez l’homme) est obtenue par détection en spectrométrie de masse Maldi-Tof des fragments peptidiques générés par digestion trypsique réalisée directement sur les billes. La sensibilité de ce test de détection permet d’envisager son utilisation pour des applications diagnostiques.
