Vendredi 13 Février 2009
CEA
Modification covalente des métalloprotéases matricielles (MMPs) à zinc par une sonde de photoaffinité : influence de la nucléophilie et de la flexibilité du résidu en position 241.
Bioconjug Chem. (2009) 20: 367-75.
CEA
Ce travail a permis d’identifier la nature des résidus modifiés par une sonde de photoaffinité au sein du site actif des MMPs.
Ayant démontré qu’une sonde de photoaffinité ciblant le site actif de la MMP-12 modifiait sélectivement le groupe amino situé sur la chaîne latérale d’un résidu Lys241, cette étude s’est attachée à démontrer que le caractère nucléophile du résidu Lys241 déterminait le rendement de photomarquage de la MMP. Ce résultat a permis de mettre au point les conditions de pH permettant le marquage covalent de MMPs possédant en position 241 un résidu His ou Arg. Cependant, l’étude de mutants de la MMP-12, possédant en position 241 différents résidus indiquent qu’en dehors de la nucléophilie, les aspects structuraux du résidu en position 241 (conformation/dynamique) doivent être pris en compte. Ainsi, le mutant His-MMP-12 possédant un bon nucléophile en position 241 (His) est très peu modifié par la sonde de photoaffinité (6%, voir figure), alors que la MMP-3 possédant en position 241 un résidu His peut être photomarquée par la sonde avec un rendement de 65%.
Dabert-Gay AS, Czarny B, Lajeunesse E, Thai R, Nagase H, Dive V. (2009) Covalent Modification of Matrix Metalloproteinases by a Photoaffinity Probe: Influence of Nucleophilicity and Flexibility of the Residue in Position 241. Bioconjug Chem.20(2):367-375.
Légende : Analyse de la radioactivité incorporée dans la MMP-12 et la MMP-3 et de différents mutants de la MMP-12 après photomarquage de ces protéines par une sonde de photoaffinité incorporant un groupe azido et un atome de tritium. Les protéines sont purifiées par électrophorèse, puis transférées sur une membrane de PVDF, analysée par un radioimageur.