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Instituts/ Institut de Recherches en Technologies et Sciences pour le Vivant (iRTSV)/ Unités / Biologie du Cancer et de l'Infection (BCI)/ Équipe PB&RC/ Thèses/ Thèses soutenues/ Caroline Gebus

Caroline Gebus

Caroline Gebus

Résumé

Interactome des antigènes protecteurs V de Pseudomonas aeruginosa et de Yersinia pestis : mécanisme d'assemblage et interaction avec l'aiguille de sécrétion de type III.

Pseudomonas aeruginosa et Yersinia pestis sont responsables d’infections graves chez les individus immunodéprimés et de la peste, respectivement. Leur pathogénicité repose sur de nombreux facteurs de virulence dont le système de sécrétion de type III (SST3) qui a une action prépondérante lors d’infections aiguës. Le SST3 est composé d’une base ancrée dans la double membrane bactérienne, d’une aiguille creuse érigée à la surface et d’un pore de translocation inséré dans la membrane de la cellule hôte permettant à la bactérie d’y injecter des toxines. L’objet de cette thèse est l’étude de l’interactome de l’antigène protecteur V, PcrV chez P. aeruginosa et LcrV chez Y. pestis. Celui-ci est situé au sommet de l’aiguille et est nécessaire au processus de translocation des toxines. L’étude des propriétés biochimiques de la protéine in vitro nous a permis de mettre en évidence sa capacité à former des oligomères présentant une structure en forme d’anneaux. Les multimères ont été observés par chromatographie d’exclusion de taille, gel natif, spectrométrie de masse native et MET. Leur formation est dépendante de la présence de l’hélice α12 C terminale de PcrV et de l’intégrité de ses résidus hydrophobes. Le processus d’assemblage de la protéine est nécessaire à sa fonction in vivo : des mutants qui sont incapables d’oligomériser perdent leur cytotoxicité envers les cellules eucaryotes.
Puis, l’interaction directe entre PcrV et la sous unité formant l’aiguille, PscF, a été mise en évidence in vitro par co-purification. De plus, deux mutants ponctuels de PscF dont le phénotype présente un défaut de translocation se sont montrés défectueux pour la liaison avec PcrV. Enfin, l’hélice C terminale de PscF est échangeable avec l’hélice α12 C terminale de PcrV comme l’atteste la capacité de polymérisation d’un hybride créé entre ces deux protéines, suggérant un rôle de celle-ci dans la formation du complexe F-V. L’ensemble de ces études montre que l’assemblage multimérique des antigènes V ainsi que leur position au sommet de l’aiguille sont des éléments essentiels à leur fonction, avec un rôle prépondérant de l’hélice α12 C terminale de PcrV. Ces conclusions pourraient permettre de mieux cibler les développements futurs de nouveaux vaccins ou agents antimicrobiens.

Soutenue le 17 octobre 2008 pour obtenir le grade de Docteur de l'Université Joseph Fourier de Grenoble I - Discipline : Microbiologie, Biochimie

Jury :


Président : Anne Imberty

Rapporteur : Ariel Blocker

Rapporteur : Sophie de Bentzmann

Examinateur : Claire Dane

Tutrice de thèse : Ina Attrée

Mots-clés :

P. aeruginosa et Y. pestis, facteur de virulence, SST3, Antigènes V (PcrV, LcrV), oligomérisation, assemblage, injectisome, cible thérapeutique