Charlotte Vendrely
- Charlotte Vendrely
- Fabien Pierrel
- Emmanuel Rossy
- Natalia Bouchmarina
- Sébastien Schoumacker
- Philippe Simon
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Charlotte Vendrely |
Résumé |
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Mécanismes d’assemblage de la protéine prion de souris. |
Les maladies à prions sont causées par la conversion de la protéine Prion (PrP) de sa forme normale, riche en hélices-α (PrPc), en une forme anormale, riche en structures ß, qui est aggrégée. Le travail réalisé au cours de cette thèse avait pour objectifs de reproduire in vitro la conversion de la PrP en utilisant un fragment long soluble (23-231) de la protéine prion recombinante de souris, de caractériser les mécanismes moléculaires de la conversion α / ß et de l’assemblage en oligomères solubles et de déterminer la cytotoxicité des formes oligomériques obtenues. Nous avons pour cela utilisé des méthodes biophysiques dont la spectroscopie infra-rouge à transformée de Fourier (FTIR) et la chromatographie d’exclusion de taille couplée à de la diffusion de lumière multi-angles (MALLS). En incubant la protéine concentrée à pH acide et à 37°C, nous avons mis en évidence deux types d’oligomères solubles de taille différentes. Les oligomères de petite taille comprennent au minimum 8 sous-unités et leur formation implique un changement concomitant de structure secondaire. Les oligomères de grande taille sont moins stables et leur formation est accompagnée d’un changement limité de leur structure secondaire. Nous avons également montré que l’ajout de sels induit dans un premier temps la formation des mêmes oligomères solubles mais aussi la formation de fibres amyloïdes sur des temps plus longs. D’autre part, nous avons montré que les oligomères présentent une forte affinité pour les bicouches lipidiques chargées négativement et provoquent l’aggrégation de ces membranes. Des tests de cytotoxicité suggèrent qu’ils sont plus toxiques pour les cellules que la forme monomérique. |
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Soutenue le 01 décembre 2004 pour obtenir le grade de Docteur de l'Université Joseph Fourier de Grenoble I - Discipline : Biologie structurale et fonctionnelle |
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Jury : |
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Mots-clés : |
Prion, agrégation de protéines, fibres amyloïdes, FTIR, diffusion de lumière |