Caractérisation structurale et fonctionnelle de MPP1, une nouvelle protéine de la famille des kinésines.
Structural and functional characterization of MPP1, a novel kinesin protein.
La protéine MPP1 "M-Phase-Phosphoprotein 1" est une protéine humaine de la famille des kinésines spécifiquement phosphorylée en mitose. Son étude biochimique a montré qu'elle a toutes les caractéristiques fonctionnelles des kinésines incluant une activité ATPase dépendante des microtubules et la capacité de se lier et de se déplacer sur ces polymères. Les tests de motilité démontrent que MPP1 se déplace vers l'extrémité plus des microtubules avec une vitesse moyenne de 70 nm/sec, ce qui la classe parmi les moteurs lents. En interphase, MPP1 se localise essentiellement dans le noyau des cellules avec un maximum de marquage en phase G2. Deux séquences NLS, une à l'extrémité C-terminale, l'autre dans les domaines C2-C3 de MPP1 pourraient participer à son ciblage nucléaire. Il a également été montré que MPP1 s'associe transitoirement aux centrosomes à la transition G1/S du cycle. En mitose, MPP1 se localise à l'équateur du fuseau central en anaphase et télophase et au corps intermédiare en cytocinèse. L'inhibition de l'expression de MPP1 par la technique d'ARN interférent montre qu'elle est essentielle à la cytocinèse. En effet, la transfection de petits ARNs d'interférence spécifiques à MPP1 induit un échec tardif de cytocinèse avec apparition de cellules binuclées et apoptose.
MPP1 "M-Phase-Phosphoprotein 1" is a human kinesin like protin that is specifically phosphorylated during mitosis. Biochemical studis have shown that MPP1 exhibits all kinesin's functional characteristics, including the microtubule-dependent ATPase activity and the ability to bind and to move along microtubules. Motility assays demonstrated that MPP1 is a slow motor protein since it moves towards the plus of the microtubules with an average speed of 70 nm/sec. During interphase, MPP1 is essentially localized in cell nuclei with maximum expression during the G2 phase. Two NLS sequences, which may involved in its nuclear localization, have been identified in the C-terminal end and in the C2-C3 domains of MPP1. Additionally, it has been shown MPP1 transiently colocalizes with centrosomes during the G1/S. During mitosis, MPP1 is localized to the spindle interzone in anaphase and telophase and to the midbody during cytokinesis. Inhibition of MPP1 expression by RNA interference shows an essential role for MPP1 in cytokinesis. Indeed, transfection of MPP1 specific small interfering RNA includes a failure of completion of the late stage of cytokinesis, which results in the apparition of binucleate cells and apoptosis.
Soutenue le 26 septembre 2002 pour obtenir le grade de Docteur de l'Université Joseph Fourier de Grenoble I - Spécialité : Biologie
